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重大突破:中国研成高端超分辨光学显微镜

北京时间12月26日,由中国科学院苏州生物医学工程技术研究所(简称中科院苏州医工所)承担的中国重大科研装备研制项目“超分辨显微光学核心部件及系统研制”通过验收。

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科研人员介绍项目研制成功的双光子-STED显微镜。(图源:VCG)

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高端平场复消色差生物显微物镜。(图源:VCG)

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科研人员展示介绍项目研制成功的一款大数值孔径物镜。(图源:VCG)

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科研人员在操作项目研制成功的激光扫描共聚焦显微镜。(图源:VCG)

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科研人员在操作项目研制成功的双光子显微镜。(图源:VCG)

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科研人员介绍项目研制成功的STED显微镜。(图源:VCG)

据报道,中科院苏州医工所已经研制出了激光扫描共聚焦显微镜、双光子显微镜、受激发射损耗(STED)超分辨显微镜、双光子-STED显微镜等高端光学显微镜。

高端显微系统广泛应用于生物学和基础医学等相关前沿领域的创新研究,尤其是10至100nm尺度的超分辨显微光学成像技术,在当今生物学和基础医学研究中,发挥着不可替代的作用。

作为生物医学实验研究的必备工具,激光扫描共聚焦显微镜比传统的荧光显微镜分辨率更高,而且可以进行层析扫描3D成像。但是共聚焦显微镜能够观察的样品厚度一般小于100um,要观察更深的样品时需要借助双光子显微镜。双光子显微镜最大的优势是观察的深度。

但是无论是激光扫描共聚焦显微镜还是双光子显微镜,都无法摆脱衍射极限的限制,为了进一步探索微观世界,需要分辨率更高的显微镜。

STED显微镜应运而生,它在共聚焦显微镜的基础上引入损耗光束将荧光光斑进一步压缩,从而实现超分辨成像。

有观察指出,中国虽然是显微镜消费大国,但长期以来,自身只能生产中低端产品,高端仪器基本依赖于进口,严重制约了中国生物学和基础医学等相关前沿领域的创新研究。

据介绍,此次通过验收的激光扫描共聚焦显微镜采用聚焦后的激光光斑作为照明光源,同时在探测器前引入针孔将聚焦光斑外的干扰信号进行过滤,因此提高了图像信噪比,横向分辨率可达200nm左右。

此外,激光共聚焦显微镜还可以对样品逐层扫描实现三维成像,以及利用多通道采集图像的功能同时获取不同光谱段的荧光扫描图像。

激光共聚焦显微镜可以观察细胞或亚细胞形态结构、鉴定细胞或组织内生物大分子,如:检测蛋白质抗体及其他分子,检测细胞凋亡,观察细胞骨架结构等;还能进行活体细胞或组织功能的实时检测。

双光子激发技术的基本原理就是用两个波长较长的光子去激发一个荧光分子。其结合激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的特点。目前双光子成像在生物医学领域广泛应用于深层组织成像以及活体成像等。

STED显微镜是一种超分辨显微镜,它的原理可以简单理解为在共聚焦显微镜的基础上加入一束面包圈状的光斑(损耗光),通过受激辐射效应减小有效荧光发光面积,将被激发的荧光物质限制在衍射极限内,从而突破光学衍射极限实现超分辨成像,目前能够实现50nm分辨率。

STED显微镜的应用领域与共聚焦显微镜相似,主要用于观察亚细胞形态结构,活细胞内生物分子的实时成像和动态跟踪等。

双光子STED显微镜将双光子显微镜与STED显微镜合二为一,结合双光子显微镜成像深度深以及STED显微镜分辨率高的优点,根据不同的成像需求选择合适的成像方式。

中国“科学大院”公众号报道称,此次通过项目验收的四套超分辨率显微镜,最高分辨率达到了50纳米,而且各有特色,在这些显微镜的背后是“已经发展起来的显微光学设计、加工、制造、装配的完整技术和工程体系”。

报道称,“超分辨显微光学核心部件及系统”项目成功实施,标志中国具备了高端超分辨光学显微镜的研制能力,将极大改善中国高端光学显微镜基本依赖进口的状况,对满足中国生物医学等前沿基础研究的定制化需求、提升创新能力,以及推动中国光学显微镜行业转型升级“具有重要的战略意义”。

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